杜鹃花组织培养技术(组织培养技术用于乡土杜鹃花培养的优缺点)

林淑齐网友提问：

杜鹃花组织培养技术

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杜鹃花组织培养技术杜鹃花为杜鹃花科杜鹃花属常绿或落叶小灌木，具有品种多、开花早、花色丰富、花期长等特点。近几年，由于扦插繁殖技术的发展，我国杜鹃花产量有了提高。但是，宝贵品种因母本少、繁殖系数低，仍不克不及满足社会需要。而组织培养正是实现杜鹃花工厂化育苗的有效办法。下面将其简单介绍如下：

一、杜鹃花组培的基本技术环节

杜鹃花组织培养，通常使用的外植体为茎尖、茎节和花蕾等。因花蕾的分化较为困难，周期长；茎尖的取材受到1定限制，故国内多采用茎节为初代培养的外植体。

杀菌处理时，杀菌能力较强的升汞（氯化汞）易造成外植体材料的褐变死亡，不适合使用。试验表白，采用饱和的次氯酸钙液上清液或五％的次氯酸钠液作为灭菌剂，效果较好，处理时间为一五至二零分钟。为加强灭菌效果，还可参加一％的克菌丹或零.一％的吐温－二零（山梨糖醇）配合使用。材料灭菌前的预处理，通常采用七零％酒精浸泡，不超过三零秒。此外，用中性洗涤剂进行材料的预处理，亦可有效降低其灭菌后的污染率。外植材料灭菌流程为：洗衣粉液浸泡二零分钟?流水冲洗至清?七零％酒精浸泡三零秒?灭菌水冲洗一分钟?五％次氯酸钠浸泡一五分钟?灭菌水漂洗三次，每次一分钟。如此，可将外植体污染率降低到一五％以下。

杜鹃花组培所用培养基，为Andeson改良MS培养基：将MS培养基中的硝酸铵和硝酸钾用量别离减至一／四，取消了碘化钾成分，铁盐的用量增加1倍。因杜鹃花科植物的原产地在高山酸性土壤，培养基的pH值宜为五.零至五.四。培养室温度二五℃，光照强度三零零零勒克斯，光照时间一二至一四小时。

杜鹃花在诱芽培养中使用的激素较1般植物有异，需要活性较强的细胞激动素类物质，才能达到满意的效果。试验表白，使用ZT的诱芽效应最为显著；添加KT的处理几乎无丛芽或侧芽发生，仅是原茎尖的伸长；而选用六－BA处理，则导致培养材料的褐变加剧，效果反不如对照。此外，在其后的增殖培养中，杜鹃花对细胞激动素种类的要求，仍以添加ZT为好。

国外在杜鹃花的组培中多使用二ip作为外源细胞激动素，效果较ZT好。但从经济的角度考虑，仍保举使用ZT。

二、杜鹃花的初代和继代增殖培养

杜鹃花初代诱芽培养，NAA浓度不得超过零.一mg／L，ZT用量的增大对诱芽效应有明显促进作用。但提高ZT浓度时，NAA浓度不适合同步增加，ZT／NAA值较大为好。从经济培养的意义出发，初代培养的激素配比以ZT五＋NAA零.零一（mg／L）为宜，培养一个月摆布时，诱芽率即可达一零零％，诱芽系数六.五。

杜鹃花继代增殖培养，对细胞激动素要求比初代培养有所下降。尽管增殖效应仍随ZT用量的增加而上升，但已不如初代培养时那么明显。此外，用于增殖培养的材料性质差别，其增殖效应也不尽相同，品种间亦存在显著的差异性。供试品种中，‘小桃红’以采用丛芽为增殖培养体时的增殖系数较高（七.六）；而‘花春雨’则反之，以取用芽条时的反应为佳（七.五）。

杜鹃花组织培养，从接种到诱芽产生，所需的时间明显长于月季和菊花等，故其继代增殖培养的周期也较长。试验中别离以三零天和四五天为培养周期进行了统计，在各激素水平配比处理中，其增殖芽总数，培养四五天要比培养三零天的高出五零％至八零％。所以，杜鹃花组培过程中，过于频繁地切割、转换培养，反达不到快繁的方向。

三、试管苗的生根培养及移栽

杜鹃花的生根培养虽不十分困难，但对培养基的要求仍与1般植物差别。其1，基本培养中无机盐大量元素的用量不克不及减半；其2，蔗糖的用量仍为三零g／L，生长素NAA的添加量以一.五至二.零mg／L为好，培养四五天时的生根率为六零％摆布。

供生根培养的试管苗，要求高一五厘米以上，具七片以上真叶，发育健壮。生根培养二周后始见发根，六周时达最高生根率。试验中曾发现，在增殖培养过程中用KT或六－BA取代ZT时，虽诱芽、增殖效应较差，但芽条发育较粗壮。因此，在增殖培养达到1定群体数量后，用KT或六?BA进行继代培养处理，可使生根率和移栽成活率明显提高。此外，在生根培养基中添加二g／L的活性炭，可使试管苗个体发育显著增强，一个月后生根率可达到九零％以上。

国外的研究资料表白，某些常规繁殖（扦插）极难生根的植物，经组织培养后获得的试管苗，生根会容易很多。有些可不经生根培养直接移植到生根介质中，生根率可达一零零％，三至四周后即可移入温室进行盆栽。这种生根介质为泥炭土、蛭石、珍珠岩的混合物，pH以四至四.五为宜。

生根试管苗的移栽入土，栽培基质为一∶一的泥炭生＋蛭石混合物。表层要求过筛，以利根系附着；下层铺粗粒，以利基质渗水。移栽时用镊子去掉根部附着的培养基（不成损伤根系）。用镊尖将基质拨1小洞，把根系放入，覆土，轻轻压实，浇足水。试管苗移栽成活的关键是包管1定的温、湿条件，移栽环境和试管培养时的条件相差悬殊，常造成移栽苗生长不适或死亡。

试管生根苗的移栽尽管在全年均可进行，但在不具备生根室的情况下，仍以春、秋两季进行较为稳妥方便。

四、组培技术在杜鹃花新品种选育中的应用

试验初期，鉴于杜鹃花外植体灭菌困难，可供试验的接种群体太小，不克不及满足正常试验的进行。为尽快筛选出合适的培养基配方及相应的培养条件，笔者结合杂交育种，采用杂交种子试管发芽的方法，再用试管实生苗的上胚轴为外植体进行研究，取得了事半功倍的效果。笔者发现，杜鹃花的杂种实生苗常规播种繁殖需三至五年才能开花，而经上胚轴培养的杂种实生苗，移栽后第2年即可开花，大大缩短了杂种实生苗的童期，对加快显花、结果类植物的育种进程具有重要意义。

1般来说，种子的灭菌处理较其他器官或组织容易得多。杜鹃花杂交种子的灭菌处理为：七零％酒精外貌浸泡一分钟，灭菌水漂洗后转零．一％升汞液浸泡一零分钟，灭菌水漂洗三次，每次一分钟以上。灭菌后再剖实取籽、接种培养，接种两周始见发芽。出苗后取用上胚轴进行诱芽快繁，繁殖系数较高。成苗后，可取茎尖或茎节再培养，培养条件和方法同前。国内组织培养涉及新品种选育的不多，特别是在观赏园艺植物方面。从发展的角度看，组培技术要连结较强的生命力，就不应离开新品种的选育。因此，有机地将组培技术与杜鹃花新品种选育结合起来，对提高绿地植物景观的建设水平、促进杜鹃花的产业化发展，都是十分有益的。

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