植物组织培养(植物组织培养是无性生殖吗)

杨莉倩网友提问：

植物组织培养

优质答案：

植物组织培养一、原理

 植物组织培养是指在无菌条件下，对离体植物组织（器官或细胞）分离并在培养基中培养，使其能够继续生长，甚至分化发育成1完整的植株的1门实验技术。组织培养的理论依据是植物细胞的全能性，即植物体的每个细胞携带着1套完整的基因组，因此具有发育成完整植株的潜在能力。植物组织傍边原本已经分化的细胞，1旦脱离原有的机体环境，成为离体状态，在适宜的营养和外界条件下，就会表示出全能性，从已经分化定型的细胞，脱分化，成为恢复分裂能力的细胞，并能重新生长发育成完整的植株。

 愈伤组织是指1个离体的细胞、1块组织或1个器官的细胞，通过脱分化不停分裂、增生子细胞，这些细胞胞分裂快，结构疏松，颜色浅而透明，逐渐形成了无序结构的1团细胞。

 二、试剂及仪器

 （1）仪器设备

 超净工作台、高压灭菌锅、微波炉、人工气候箱、电子天平、移液器（一-五ml）、恒温磁力搅拌器、酸度计、手术刀、手术剪、称量纸、皮筋、封口膜、3角烧瓶（五零零ml、一零零ml）、量筒、烧杯（一零零零ml）、试剂瓶（一零零零ml、一零零ml）、长镊子、记号笔（或标签纸）、培养皿、酒精灯、打孔器

 （2）试剂

 七五%酒精、次氯酸钠（或h二o二）、植物生长激素、蔗糖、脂粉、hcl、naoh、kh二po四、cocl二?六h二o、烟酸、盐酸-硫胺素（vb一）、盐酸-吡哆醇（vb六）、肌醇、甘氨酸

 三、实验步骤

 （1）培养基配制

 一.培养基的选择

 植物组织培养中应用的培养基，1般由无机营养物、碳源、维生素、生长调节剂和有机附加物等5类物质组成。

 无机营养物包孕大量元素和微量元素。大量元素：c、h、o、n、p、s、k、ca、na、mg等，微量元素：mn、zn、cu、b、mo、fe等。碳源1般为蔗糖。维生素中只有硫胺素是必须的，而烟酸、维生素b六和肌醇对生长之起促进作用。常用的生长调节剂有iaa（吲哚乙酸）、iba（吲哚-三-丁酸）、naa（萘乙酸）、noa（萘氧乙酸）、p-cpa（对氯苯氧乙酸）、二，四-d（2氯苯氧乙酸）、二，四，五-t（3氯苯氧乙酸）；bap（苄氨基嘌呤）、六-ba（苄基腺嘌呤）、二-zi（异戊烯氨基嘌呤）、kt（激动素)等。有机附加物是指甘氨酸、水解酪蛋利剑、椰子乳等，可促进分化，但如培养基配方适当，则大多数组织是不需要的。

 培养基的种类、成份直接影响到培养材料的生长发育，故应按照培养植物的种类和部位，选择适宜的培养基。培养基种类繁多，最基本、最常用的培养基为ms培养基（见表一）。

 二.培养基的配制

 ①先按表一配制ms培养基贮液，②再将贮液与其他成分按比例混合。③此外还需参加适量的蔗糖作为碳源，起支持作用的琼脂粉，适量的生长调节剂等。④将上述培养基加热溶解后，加蒸馏水使培养基达到终体积。⑤再用零.一mol/lnaoh或零.一mol/lhcl调节培养基的ph值至最适。⑥分装至3角烧瓶，封口膜封口，等待灭菌后使用。

 三.几种诱导愈伤组织的培养基

 胡萝卜ms+零.五mg/l六ba+零.五mg/lnaa

 玫瑰叶盘，芽ms+零.五mg/l六ba+零.五mg/lnaa

 烟草叶盘、叶柄ms+零.一mg/l六ba+零.五mg/lnaa

 ph五.八，蔗糖三零%，琼脂粉六.五g/l。

 （2）灭菌

 一．培养基及器具灭菌

 培养基、无菌水需要在高压灭菌锅中灭菌。灭菌作用取决于温度，常用的灭菌温度为一二一℃，所需时间应随要灭菌的液体的容积变化而变化（见表二）灭菌结束后待温度下降到五零℃以下，才能取出已灭菌的培养基。

 可用同样方法对器具同时进行灭菌，包孕：培养皿、解剖刀、剪子、滤纸、镊子、打孔器等。

 二．工作环境灭菌

 接种前一ｈ打开超净工作台和棚面的紫外灯照射四零min。杀菌结束后，先关掉棚面的紫外灯，再打开风机，最后关掉超净工作台上的紫外灯。在接种后休息时，要先打开台面的紫外灯，再关风机，最后打开棚面紫外灯。不克不及将风机与台面上的紫外灯同时关闭或先关闭风机再开紫外灯。

 三.植物材料的灭菌

 植株各部分的外貌携带着各种微生物，他们是植物组培的污染源，所以在接种培养前必需进行彻底的外貌消毒；组织内部侵染的真菌或细菌很难消除，这些组织1般淘汰不消。消毒前需用流水清洗植物材料外貌污垢，再用无菌洁净滤纸吸干水分。

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