组培应用之茎尖脱毒(影响茎尖培养脱毒效果的因素)

涂明全网友提问：

组培应用之茎尖脱毒

优质答案：

组培应用之茎尖脱毒一、理论依据

植物细胞全能性学说一九四三年white提出了“植物细胞全能性”学说。一九五八年，steward和reinert对这1学说进行了验证，即1切植物都是由细胞构成的，植物的幼龄细胞含有全套遗传基因，具有形成完整植株的能力。

植物病毒在寄主体内分布不均匀怀特和利马塞特.科钮特发现，植物根尖和茎尖部分病毒含量极低或不克不及发现病毒。植物组织内的病毒含量随与茎尖相隔距离加大而增加。究其原因可能有4个方面：其1，1般病毒顺着植物的微管系统移动，而分生组织中无此系统；病毒通过胞间连丝移动极慢，难以追上茎尖分生组织的活跃生长；其2，活跃生长的茎尖分生组织代谢水平很高，致使病毒无法复制；其3，植物体内可能存在“病毒钝化系统”，而在茎尖分生组织内活性应最高，钝化病毒，使茎尖分生组织不受病毒侵染；其4，茎尖分生组织的生长素含量很高，足以按捺病毒增殖。

二、脱毒方法

培育脱毒母株，获得外植体

a.正确选择品种。用于生产的品种选择很重要。因差别品种产量、品质特性及对病毒侵染的反应差别，关系到去病毒的增产效果和脱毒种苗的应用年限。因此，要选择品质好，产量高，抗、耐病毒病性好的品种。

b.确保品种纯度。确保获取快繁外植体母株的品种纯度是生产高纯度、优质种苗的基础。特别是栽培历史长的无性繁殖作物，用种量大、易造成品种混杂。因此严格鉴定获取快繁外植体母株的品种纯度，可制止无效劳动，提高工作效率。

c.获得外植体。外植体可直接取于大田，但最好取于室内培育的，选择生长健壮、无病虫害的母株，既不受季节影响，又易消毒。

选择培养基。研究确定的基本培养基有许多种，其中ms适合于大多数双子叶植物，培养基b五和培养基n六适合于许多单子叶植物，white培养基适于根的培养，应先试用这些培养基再按照实际情况对其中的某些成分做小范围调整。1般培养用ms培养基均能成功，但大蒜、洋葱用b五和n六培养基较好。

激素浓度和相对比例的确定。用差别种类的激素进行浓度和比例的配合试验。在比力好组合基础上进行小范围的调整，设计出新的配方，经过反复摸索，选出1种适合培养基。

剥离和接种将处理好的植物部分，如包罗茎尖的茎段或芽等灭菌，置超净工作台四零倍显微镜下，剥去外叶和较大的叶原基，袒露诞生长点分生组织，剥离带一~二个叶原基的分生组织，接种到试管内的芽分化培养基上。

继代培养生根和快繁将已接种外植体的试管置℃，光照三零零零lx，在光周期一三-一六h/d的培养基中培养二-三周成苗。待苗长至一-二cm高，转入生根培养基，生长七-一零d生根，转入快繁培养基继续繁殖。

三、茎尖培养的关键技术环节

要提高茎尖培养成苗率和脱毒必需掌握下列关键环节

剥取适当大小的茎尖通常培养茎尖越小，产生幼苗的无毒率越高，而成活率越低。差别病毒种类去除的难易程度差别。因此需针对差别的病毒种类，培养适宜大小的茎尖。例如剥离培养带1个叶原基的生长点产生的马铃薯植株，可去处全部马铃薯卷叶病毒，去除八零%y病毒和a病毒，去除零.二%x病毒。马铃薯病毒去除从易到难的挨次是：马铃薯卷叶病毒、马铃薯a病毒、马铃薯y病毒、奥古巴病毒、马铃薯m病毒、马铃薯x病毒、马铃薯s病毒和纺锤块茎类病毒。对于同1种病毒，剥离茎尖越小，脱毒率越高。大蒜带一个叶原基的茎尖产生苗中八四%检测不到病毒，而带二-三个叶原基的无毒株率仅五九%。因此，1般剥离带一-二个叶原基的茎尖即可获得较好的脱毒效果。对于难脱除的病毒则应配合采用其他办法。

选用正确的培养基培养基由大量元素、微量元素、有机成分、植物激素、糖和琼脂调配而成。1般铵盐及钾盐浓度高，有利于茎尖成活，反之则有利于生根或根生长，植物激素对茎尖的生长和发育有重要作用。植物细胞分裂素类如六-ba有利于长芽，而生长素类naa有利于生根。差别品种对激素的反应差别。

适宜的环境条件大蒜、马铃薯、草莓接种后置温度二三-二五℃，光照一零零零-三零零零lx，每日照光一三-一六h。甘薯茎尖培养需温度较高，约二六-三二℃，光强和照光时间同马铃薯和大蒜。

茎尖接种后的生长及调节方法茎尖接种后的生长情况主要有四种。一）生长正常，生长点伸长，基本无愈伤组织形成，一-三周内形成小芽，四-六周长成小植株。二）生长停止，接种物不扩大，渐变褐色，至枯死。此情况多因剥离操作过程中茎尖受伤。三）生长缓慢，接种物扩大缓慢，渐转绿，成1绿点。说明培养条件不适应，要迅速转入高激素浓度培养基，并适当提高培养温度。四）生长过速，生长点不伸长或略伸长，大量疏松愈伤组织形成，需转入无激素培养基或采取降低培养温度等办法。

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